昆蟲(chóng)elisa檢測(cè)試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)海ū驹噭┫到y(tǒng)提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)請(qǐng)按照說(shuō)明自行在小試管中倍比稀釋?zhuān)┌聪卤砀駡?zhí)行：
120ng/ml：（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）：120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60ng/ml：（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）：120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30ng/ml：（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）：120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15ng/ml：（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）：120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
7.5ng/ml：（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）：120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2、根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3、 加樣：
a、空白孔：（空白對(duì)照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗保幼激素(JH)抗體，鏈霉親和素-HRP，其余各步操作相同 ；
b、標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，鏈霉親和素-HRP50μl（標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素標(biāo)記抗體，故在操作時(shí)不加，只加鏈霉素-HRP）；
c、樣本反應(yīng)孔：加入樣本40μl，然后各加入抗保幼激素(JH)抗體10μl、鏈霉親和素-HRP（空白孔除外）50μl。蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6、顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
7、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
8、測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
結(jié)果判斷：
1、每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。
2、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。
3、手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線(xiàn)連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。通過(guò)標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出其濃度。推薦使用專(zhuān)業(yè)制作曲線(xiàn)軟件進(jìn)行分析計(jì)算結(jié)果。
4、若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
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